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16S rDNA 融合引物扩增建库技术


技术简介

本实验流程是微生物多样性 16S 融合引物文库制备的标准化操作规程 (SOP),适用于细菌、真菌、古菌的样品。

技术原理

通过含有测序引物序列、barcode 序列、特异区域序列的融合引物,扩增原始样品的目的区域,而后经过片段选择精筛选出目标区域用于上机测序。            

技术流程

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16S rDNA barcode 建库技术

技术简介

实验流程是微生物多样性 16S 融合引物文库制备的标准化操作规程  (SOP) ,适用于细菌、真菌、古菌的样品。

实验原理

通过含有 barcode 序列及特异区域序列的引物扩增目的区域,而后将扩增产物进行 pooling,经过片段选择精确筛选出目标区域用于上机测序。

技术流程 

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RNA 建库技术

技术简介

本实验流程是转录组文库制备的标准化操作规程  (SOP) ,适用于起始样品为 0.1 ~1μg Total RNA 的样品,作为构建插入片段为 250-300bp RNA 配对末端测序文库。

实验原理

通过 Oigo-dT 磁珠在 Total RNA 中富集 mRNA,通过二价阳离子随机打断 mRNA、合成一链和二链 cDNA,再通过末端修复、加 A、连接接头和 PCR 富集得到最终的 cDNA 文库。

技术流程 

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外显子捕获建库技术

技术简介

本实验流程是外显子文库制备的标准化操作规程  (SOP) ,适用于起始样品为 1-5μg 基因组 DNA 的样品,作为构建插入片段为 250-300bp DNA 文库。

实验原理

将片段化 DNA 加完 adapter 的产物与带有生物素标记的寡核苷酸探针杂交,杂交后利用含链酶亲和素标记的磁珠与 DNA 产物和探针结合体孵化结合,再以磁力架固定磁珠;随后利用洗脱液洗去未与探针杂交的 DNA 片段,并将目的序列溶解;最后对目标区域序列进行扩增, 和高通量测序。为了保证其探针捕获效率,其实验过程也需要加入封闭多拷贝序列和建库引入的 Primer 等的序列。

技术流程 


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简化基因组 (RAD) 建库技术

技术简介

本实验流程是 RAD 文库制备的标准化操作规程  (SOP) ,适用于起始样品为 1-5μg 基因组 DNA 的样品,作为构建插入片段为 300-500bp DNA 文库。

实验原理

利用限制性内切酶对基因组进行酶切,产生一定大小的片段,然后对酶切后产生的 RAD 标记进行高通量测序。

技术流程

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大片段建库技术

技术简介

本实验流程是大片段文库制备的标准化操作规程  (SOP) ,适用于起始样品为 20ug 基因组 DNA 的样品,作为构建 1K,2K,5K,10K,20Kmate pair DNA 文库。

实验原理

将基因组DNA随机打断到特定大小 ( 1-20 kb范围可选 ) ,经末端修复,生物素标记和环化等实验步骤后,把环化后的 DNA 分子打断成 300-500 bp 的片段并通过带有链亲和霉素的磁珠把那些带有生物素标记的片段捕获。再经末端修饰和加上特定接头后建成 mate-pair 文库,然后上机测序。

技术流程

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